不同温度热处理与抗体诱导对红细胞衰亡的影响

目的 探讨不同温度热处理及Ig G抗体诱导对红细胞衰亡的影响。方法 设3组分别用50、56及60℃3个温度加热处理2%Rh D+红细胞悬液5、10、20 min;另外设设1组,以Rh DIg G抗体75μL与2%Rh D+红细胞悬液150μL混合,同时设对照组(以PBS代替Rh D),37℃30 g振荡(离心),诱导时间分别为0、16、24、40、48及72 h。用Alexa Fluor 488 Annexin V/Dead Cell试剂盒检测红细胞的衰亡比例。结果 流式检衰亡细胞比例(%):50℃/5 min、56℃/5 min、60℃/5 min组分别为1. vs 5. vs 16.,50℃/10 min、56℃/10 min、60℃/10 min组分别为1. vs 9. vs 29.,50℃/20 min、56℃/20 min、60℃/20 min分别为1. vs17. vs 61.(P<0.01);除了50℃/5 min和50℃/10 min 2个组外,同一温度下,各组随着加温时间的延长,衰亡细胞比例增大,不同温度加热20 min时,死亡细胞比例(AV-PI+及AV+PI+红细胞之和)较5 min和10min有所升高,尤以60℃组最为明显,但红细胞破碎严重,检测到的细胞总数较少,死亡细胞比率(%):60℃/5 min、60℃/10 min、60℃/20 min组分别为0. vs 0. vs 6.(P<0.01)。抗体诱导试验:诱导时间0、16、24、40、48、72 h的衰亡和死亡细胞的比例(%)各自分别为0.、0.,6.、3.,8.、6.,13.、9.,15.、10.,31.、10.(P<0.01)。结论 加热及抗体处理诱导均会引起红细胞衰亡;提示血清学试验中以热处理温度≤56℃、热处理时间<10 min为宜。

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